347 rustfritt stål kjemisk sammensetning Størrelsen på venøst ​​eller kapillært blod, spesifikt for SARS-CoV-2, T-celleresponser bestemmer immuniteten mot COVID-19.

Takk for at du besøker Nature.com.Du bruker en nettleserversjon med begrenset CSS-støtte.For den beste opplevelsen anbefaler vi at du bruker en oppdatert nettleser (eller deaktiverer kompatibilitetsmodus i Internet Explorer).I tillegg, for å sikre kontinuerlig støtte, viser vi nettstedet uten stiler og JavaScript.
Skyveknapper som viser tre artikler per lysbilde.Bruk tilbake- og neste-knappene for å gå gjennom lysbildene, eller lysbildekontrollknappene på slutten for å gå gjennom hvert lysbilde.

347 rustfritt stål kjemisk sammensetning

Kjemisk sammensetning av rustfritt stål 347 spiralrør

Den kjemiske sammensetningen og de mekaniske egenskapene til det rustfrie stål 347 spiralrøret er som følger:
- Karbon – 0,030 % maks
- Krom – 17–19 %
– Nikkel – 8–10,5 %
- Mangan – 1 % maks

Rustfritt stål 347 spiralrørs mekaniske egenskaper

I følge produsenten av rustfritt stål 347 coil tube, mekaniske egenskaper for 347 coil tube:
- Strekkstyrke (psi) – 75 000 min
- Yield styrke (psi) – 30 000 min
- Forlengelse (% i 2″) – 25 % min
- Brinell hardhet (BHN) – 170 maks

Bruksområder og bruk av rustfritt stål 347 spiralrør

• Rustfritt stål 347 spiralrør brukt i sukkerfabrikker.
• Rustfritt stål 347 spiralrør brukt i gjødsel.
• Rustfritt stål 347 spiralrør brukt i industrien.
• Rustfritt stål 347 spiralrør brukt i kraftverk.
• Rustfritt stål 347 spiralrør brukt i mat og meieri.
• Rustfritt stål 347 spiralrør brukt i olje- og gassanlegg.
• Rustfritt stål 347 coil tube produsent brukt i skipsbyggingsindustrien.

SARS-CoV-2-spesifikke T-celler antas å beskytte mot infeksjon og progresjon av COVID-19, men det er ingen direkte bevis for dette.Her sammenlignet vi fullblodsmålinger av SARS-CoV-2-spesifikke interferon-γ positive T-celler med positive COVID-19 diagnostiske testresultater (PCR og/eller lateral flow) innen 6 måneder etter Lians blodinnsamling.Blant 148 deltakere som donerte venøse blodprøver, var omfanget av SARS-CoV-2-spesifikk T-cellerespons signifikant høyere hos de som forble beskyttet enn hos de som ble smittet (P < 0,0001).% risiko for infeksjon, mens høy intensitet reduserte denne risikoen til 5,4 %.Disse resultatene ble generalisert til ytterligere 299 deltakere som testet en skalerbar kapillærblodanalyse som kunne lette tilgangen til populasjonsskala T-celle-immunitetsdata (14,9 % vs. 4,4 %).Dermed kan målingen av T-celler spesifikke for SARS-CoV-2 forutsi risikoen for infeksjon og bør evalueres ved overvåking av individ- og populasjonsimmunstatus.
Å måle og forstå immunresponsen på SARS-CoV-2-infeksjon er viktig for å utvikle effektive fremtidige strategier for å minimere folkehelsen og de økonomiske konsekvensene av fremtidige COVID-19-utbrudd.Identifisering av immunkorrelater vil gi viktig informasjon om en populasjons mottakelighet for virusinfeksjon, muligens tidlig varsling om topp sykehusinnleggelser, og også tillate folk å personlig håndtere risikoen for infeksjon og risikoen for å infisere andre.Immunovervåking har vist seg avgjørende for å evaluere effektiviteten av COVID-19-vaksiner hos friske og høyrisikopasienter1,2,3, spesielt i SARS-CoV-24-mutanter, og påvisning av immunkompromitterte vil bety behovet for å øke immuniteten Bli vaksinert og forebygge fremtidige utbrudd.
Et individs nivå av immunitet mot SARS-CoV-2-infeksjon avhenger av flere faktorer: viral belastning på eksponeringstidspunktet, virusvarianter, alder, tidligere vaksinasjon/infeksjonsstatus, komorbiditeter, medisiner og viktigst av alt, anti-SARS-CoV-infeksjon .2 adaptiv immunrespons oppstår på tidspunktet for eksponering for viruset5.Evaluering av immunresponsen på SARS-CoV-2-infeksjon og/eller vaksinasjon har fokusert på serologiske analyser som måler tilstedeværelsen av antistoffer spesifikke for et strukturelt protein (f.eks. spike glykoprotein).Tilstedeværelsen eller fraværet av antistoffer alene bestemmer imidlertid ikke nøyaktig en beskyttende immunrespons, ettersom responsene er betydelig svekket over tid6 og nøytralisering av SARS-CoV-2-varianter hos friske eller dobbeltvaksinerte individer Svak aktivitet, noe som kan føre til stor antall gjennombruddsinfeksjoner7.Faktisk avtok beskyttelsen mot symptomatisk COVID-19 forårsaket av Omicron-varianten (B.1.1.529) til omtrent 10 % etter bare 4–6 måneder med mRNA-vaksinasjon, selv om beskyttelsen mot alvorlig sykdom vedvarte >68 % i minst 7 måneder8.Måling av adaptive minne-T-celleresponser, som gir langsiktig beskyttelse mot virusinfeksjon, er den beste indikatoren på mottakelighet for SARS-CoV-2-infeksjon, og derfor en bedre indikasjon på risikoen for å teste positivt for COVID-199, siden spesifikk T celler kan forhindre infeksjon.uten serokonvertering10,11.Målingen av T-celleresponser har imidlertid fått mindre oppmerksomhet på grunn av metodiske vanskeligheter og logistiske problemer med å innhente og transportere venøse blodprøver, spesielt når man utfører store observasjonsstudier for å vurdere vaksineeffektivitet og overvåke immunitet.Vaksinerte individer viser imidlertid robust T-celleaktivitet mot SARS-CoV-2-varianter, noe som potensielt oppveier tapet av antistoffreaktivitet for å begrense alvorlighetsgraden av COVID-1912,13.
Her søkte vi å forstå om en enkelt måling av SARS-CoV-2 T-cellerespons kunne forutsi den absolutte risikoen for SARS-CoV-2-infeksjon innen 6 måneder etter blodprøvetaking, uavhengig av tidligere immunpåvirkende faktorer.For å gjøre T-celletesten høy gjennomstrømming og anvendelig for større studier, prøvde vi også å gjøre testen miniatyrisert slik at den kan utføres ved hjelp av en kapillær fingerstikkblodprøve.
Vi målte cellulære og humorale immunresponser hos friske givere ved å bruke en kombinert påvisning av SARS-CoV-2 T-celler og IgG-antistoffer basert på helvenøst ​​blod (for deltakerkarakteristikker, se mars 2022 14. Hos vaksinerte givere, SARS-CoV-2- spesifikke T-cellulære responser ble bestemt ved å måle plasma interferon-y (IFN-y) nivåer etter fullblodstimulering med SARS-CoV-2-peptid (som tidligere, ref. 14,15,16,17,18) og IgG-responser assosiert med nukleokapsid (N) økte hos de som rapporterte en tidligere infeksjon, selv om begge responsene var høyere hos tidligere infiserte uvaksinerte donorer, maksimalt i kroppen (fig. 1a,b).IgG-responser mot spike glykoproteiner (RBD, S1, S2) var høyest hos tidligere infiserte vaksinerte givere (figur 1c–e).
en SARS-CoV-2-spesifikk IFN-γ+ T-cellerespons ble målt ved venøs fullblodanalyse og basert på deltakernes vaksinasjoner og tidligere SARS-CoV-2-infeksjonsstatus (bekreftet ved PCR og/eller lateral flow-test)' Vac + /Inf +' n = 60 (grønn), 'Vac + /Inf-' n = 82 (blå), 'Vac-/Inf +' n = 4 (gul), 'Vac-/Inf-' n = 1 (ikke søkt).SARS-CoV-2-spesifikke IgG-bindingsreaksjoner er rettet mot nukleokapsid (“N”) (b; ****P < 0,0001, **P = 0,0016), spiked reseptor-bindende domene (“RBD”) (c; ** P = 0,0022, *P < 0,015), pigg underenhet 1 ("S1") (d; ***P = 0,0005, *(Vac + /Inf+ vs. Vac + /Inf-) P = 0,022, *(Vac- /Inf+ vs. Vac+/Inf-) P = 0,012) og topp underenhet 2 (“S2”) (e) ble målt ved venøse fullblodprøver og basert på deltakervaksinasjon og tidligere SARS -CoV-2 (bekreftet av PCR og/ eller lateral flow test) smittsom status.'Vac + /Inf +' n = 60 (grønn), 'Vac + /Inf-' n = 71-82 (blå), 'Vac-/Inf +' n = 4 (gul).Sammenligninger ble gjort ved å bruke Kruskal-Wallis-testen, justert for flere sammenligninger ved bruk av Dunn-testen.Dataene vises som diagrammer (senterlinje ved median, øvre grense ved 75. persentil, nedre grense ved 25. persentil) med værhår ved minimums- og maksimumsverdier.Hver prikk representerer en donor.Rådata leveres i form av rådatafiler.
Etter blodprøvetaking ble deltakerne bedt om å selvrapportere positive PCR- og/eller lateral flow-testresultater for COVID-19;hvis deltakerne testet positivt mellom 1. september 2021 og 29. desember 2021, ble de antatt å være infisert med Delta (B.1.617.2) variant coronavirus og Omicron (B.1.1.529) til Public Health Wales etter 29. desember 2021, da dette alternativet til bekymring blir dominerende.Blant 148 evaluerbare givere observerte vi en infeksjonsrate på 26,3 % (39/148) innen 6 måneder etter bloddonasjon, hvorav 38 fikk en andre eller tredje dose av covid-19-vaksinen (infeksjonsgjennombruddet skjedde etter Pfizer/BioNTech ( BNT162b2) mRNA-vaksine eller AstraZeneca-vaksine (ChAdOx1 nCoV-19));en uvaksinert donor ble også smittet.Størrelsen på SARS-CoV-2-spesifikke IFN-γ-positive T-celleresponser var signifikant lavere hos de som rapporterte en positiv diagnostisk test for COVID-19 enn hos uinfiserte givere (P < 0,0001; Fig. 2a), hovedsakelig pga. optimal induksjon av T-celleresponser ved vaksinasjon hos noen deltakere (P = 0,050; Supplerende Fig. 1).Det var ingen korrelasjon mellom størrelsen på IFN-γ+ T-celleresponsen og tiden til et positivt COVID-19-testresultat (tilleggsfigur 2).I motsetning til dette var verken RBD-, S1-, S2-bindende IgG-responser (figur 2b–d) eller RBD-, S1-nøytraliserende antistoffresponser spesifikke for villtype eller delta SARS-CoV-2 (B.1.617).) (Supplerende Fig. 3) kan skille mellom personer med risiko for infeksjon.Imidlertid korrelerte lave N-koblede IgG-responser mot SARS-CoV-2 med risikoen for COVID-19-infeksjon (P = 0,0084; figur 2e);de som testet positivt var 85 % mindre sannsynlige (P = 0,00035; ELLER 0,15, 95).% KI: 0,047–0,39 (tilleggsfigur 4).
Venøse blodprøver fra friske givere (n = 148) vurderte SARS-CoV-2-spesifikke IFN-γ+ T-celleresponser (a; ****P < 0,0001) og binding av Spike-reseptoren til den spesifikke SARS-CoV -2 stimulanser.domene ("RBD") (b), spike 1 underenhet ("S1") (c), spike 2 underenhet ("S2") (d), og nukleokapsid ("N") (e; **P = 0,0084 ) .Deltakere som testet positivt for COVID-19 (PCR og/eller lateral flow) identifiserte;alle infeksjoner skjedde innen 6 måneder etter blodprøvetaking.Sammenligninger ble gjort ved å bruke en to-halet Mann-Whitney-test.Dataene vises som diagrammer (senterlinje ved median, øvre grense ved 75. persentil, nedre grense ved 25. persentil) med værhår ved minimums- og maksimumsverdier.Hver prikk representerer en donor.ns er ikke viktig.Varmekartet f viser Spearmans rang-korrelasjoner mellom variabler for det angitte datasettet.Sammenligninger som ikke var statistisk signifikante ble ekskludert fra matrisen og merket med tomme celler.Rådata leveres i form av rådatafiler.
Den forhåndsinnstilte diagnostiske positive cutoffen på 14 ble ansett for å være for vilkårlig til å vurdere risikoen for re-infeksjon, så interkvartile områder ble etablert for å etablere absolutte risikoparametere.Den statistiske modellen, som kun inkluderte variabler som hadde en signifikant effekt på resultatene, viste at størrelsen på den SARS-CoV-2-spesifikke IFN-γ+ T-celleresponsen var den viktigste immunbiomarkøren for å bestemme et individs sjanser for å bli testet for COVID.-19 positive (Figur 2f og Supplerende Figur 4).Pasienter med en SARS-CoV-2-spesifikk IFN-γ+ T-cellerespons i tredje (194-489 pg/ml IFN-γ) og fjerde (>489 pg/ml IFN-γ) kvartil 65 % (P = 0,055; OR 0,35, 95 % KI: 0,11–1,00) og 90 % (P = 0,0050; OR 0,098, 95 % KI: 0,014–0,42) hadde flere deltakere.Sjansene er små (Supplerende Fig. 4).Totalt sett hadde deltakere med en SARS-CoV-2-spesifikk T-cellerespons fra venøst ​​blod ≤79 pg/mL IFN-γ 43,2 % risiko for gjennombruddsinfeksjon etter 6 måneder, sammenlignet med en respons >489 pg/ml.ml IFN-γ hadde en infeksjonsrisiko på 5,4 % (tabell 2).
Venøs fullblodtesting er begrenset i omfang på grunn av behovet for prøvetaking av phlebotomist.For å øke tilgjengeligheten av T-celle- og IgG-testing for SARS-CoV-2, er det utviklet en alternativ metode for kapillærblodprøvetaking for å tillate deltakerne å ta blodprøver fra fingerstikk hjemme.Så vidt vi vet, har det ikke vært tidligere rapporter om måling av antigenspesifikk T-cellefunksjon i kapillære blodprøver.Det er tidligere vist en sterk sammenheng mellom antall lymfocytter oppnådd ved bruk av sammenlignbare kapillære og venøse blodprøver.I tillegg har det blitt rapportert at fullblodsbaserte analyser som måler SARS-CoV-2-spesifikke T-celleresponser bruker bare 320 μL venøst ​​blod,20 og eliminerer bekymringer om frekvensen av stamceller T-celler i kapillære blodprøver.
Vi brukte denne high-throughput standardiserte samarbeidsanalysen av SARS-CoV-2 T-celler og IgG-antistoffer basert på kapillært fullblod for å måle cellulær og humoral immunrespons hos deltakere med ulike komorbiditeter og tidligere vaksinasjons-/infeksjonsstatus (tabell 1).rekruttert fra hele Storbritannia mellom 24. januar og 14. mars 202214. Flertallet (90,9 %) av fingerprøvene ble korrekt innhentet og sendt til laboratoriet innen 24 timer etter innsamling.I noen tilfeller ble prøver mottatt innen 48 timer etter bloduttak, men ingen av disse prøvene besto kvalitetskontroller og påvirket ikke totale T-celle- eller antistoffmålinger (tilleggsfig. 5).Selv om det var forskjeller i størrelsen på den SARS-CoV-2-spesifikke IFN-γ+ T-celleresponsen målt i respektive kapillær- og venøse blodprøver hos enkelte individer, var det ingen signifikante forskjeller totalt sett (P = 0,88; Supplerende Fig. 6 ).).
SARS-CoV-2-spesifikke IFN-γ+ T-celleresponser var signifikant økt hos vaksinerte individer som også rapporterte en tidligere infeksjon (P = 0,0001), men ikke signifikant høyere enn hos tidligere infiserte uvaksinerte donorindivider (P = 0,19, fig. 3a).).IgG-responser mot piggglykoprotein (RBD, S1, S2) var signifikant høyere hos vaksinerte givere enn hos uvaksinerte givere, uavhengig av tidligere infeksjonsstatus (figur 3b-d).Interessant nok var den gjennomsnittlige N-bundne IgG-responsen høyest hos tidligere infiserte uvaksinerte deltakere sammenlignet med vaksinerte deltakere, selv om dette ikke nådde betydning (figur 3e).Blant uvaksinerte og uinfiserte givere som selv erklærte seg, var 15 av 37 (40,5 %) deltakere positive for N-koblet IgG, over den tidligere etablerte terskelen på 2,0 BAU/mL14;disse 15 deltakerne Tolv av disse pasientene testet positivt for IFN-γ+ T-cellerespons over den tidligere etablerte terskelen på 22,7 pg/mL IFN-γ14.Derfor er det sannsynlig at disse deltakerne tidligere var infisert med SARS-CoV-2 og ikke ble testet for COVID-19 på grunn av personlige valg, mangel på PCR og/eller lateral flow-utstyr, eller var asymptomatiske.Selv om det var en signifikant korrelasjon mellom T-celleresponser på IFN-γ+ og N-koblede IgG-nivåer hos uvaksinerte givere (P = 0,0044; Supplerende figur, reduserte N-koblet IgG-respons raskere enn N-koblet IgG-respons, mens IFN-γ + T-celleresponser ble opprettholdt uavhengig av vaksinasjonsstatus, selv om antallet donorer 50 uker etter utfordring var lavt (tilleggsfigur 8). Vaksinasjonstypen var generelt lite forskjellig i observerte IgG-responser spesifikke for SARS-CoV-2, T celler og RBD-assosierte, selv om deltakere som fikk to doser BNT162b2 etterfulgt av mRNA1273-revaksinering, viste signifikant høyere nivåer av IFN-γ + T-celler var mer følsomme for SARS-CoV-2 enn de som fikk to doser ChAdOx1 og BNT162b2 (tillegg Fig. 9) I tillegg hadde rapporterte komorbiditeter liten total forskjell i observerte T-celleresponser sammenlignet med friske givere (Supplerende Fig. 10).
en SARS-CoV-2-spesifikk IFN-γ+ T-cellerespons ble målt ved fullblodkapillæranalyse og var basert på deltakernes vaksinasjoner og tidligere SARS-CoV-2-infeksjonsstatus (bekreftet ved PCR og/eller lateral flowtest).'Vac + /Inf +' n = 42 (grønn), 'Vac + /Inf-' n = 158 (blå), 'Vac-/Inf +' n = 33 (gul), 'Vac- /Inf-' n = 37 (grå).****P < 0,0001, ***P = 0,0001, *(Vac+/Inf- vs. Vac-/Inf-) P = 0,045, *(Vac-/Inf+ vs. Vac- /Inf-) P = 0,014 .SARS-CoV-2-spesifikke IgG-bindingsreaksjoner til piggreseptorbindingsdomenet (“RBD”) (b; ****P < 0,0001, ns: ikke signifikant), piggunderenhet 1 (“S1”) (c; * * **P < 0,0001, ns: ikke signifikant), piggunderenhet 2 ("S2") (d; ****P < 0,0001, ***P = 0,0005, *P = 0,016 ) og nukleokapsid ("N") (e; ****P < 0,0001, ns ikke signifikant) ble målt ved hjelp av venøs helblodsanalyse og basert på deltakernes vaksinasjoner og tidligere SARS-CoV-2 (bekreftet ved PCR og/eller lateral flowanalyse) Infeksjoner ble delt inn i status.'Vac + /Inf +' n = 46 (grønn), 'Vac + /Inf-' n = 182 (blå), 'Vac-/Inf +' n = 34 (gul), 'Vac-/Inf-' n = 37 (grå).Sammenligninger ble gjort ved å bruke Kruskal-Wallis-testen, justert for flere sammenligninger ved bruk av Dunn-testen.Dataene vises som diagrammer (senterlinje ved median, øvre grense ved 75. persentil, nedre grense ved 25. persentil) med værhår ved minimums- og maksimumsverdier.Hver prikk representerer en donor.Rådata leveres i form av rådatafiler.
Som før ble deltakerne bedt om å rapportere positive PCR- og/eller laterale blodstrømresultater for COVID-19;ifølge UK Health Agency ble deltakerne antatt å ha vært infisert med Omicron-koronaviruset (B.1.1.529) på tidspunktet for testing av den positive virusvarianten, siden den var den dominerende varianten i Storbritannia i løpet av studieperioden.Blant 299 evaluerbare givere observerte vi en infeksjonsrate på 8,0 % (24/299) innen tre måneder etter kapillærdonasjon, hvorav syv ikke var vaksinert.Andelen komorbiditeter blant alle deltakerne var lavere hos de som testet positivt for covid-19 (10,7 %) enn de som testet negativt for covid-19 (24,4 %, tabell 1), noe som kan skyldes at deltakere med visse sykdommer er mer forsiktige og beskytter mot potensielle konsekvenser som diabetes og kreft.Som observert i en venøs blodkohort, SARS-CoV-2-spesifikke interferon-γ (IFN-γ)-positive T-celler målt i kapillære blodprøver fra individer som rapporterer en positiv diagnostisk test for COVID-19.Responsstørrelsen var signifikant lavere enn hos uinfiserte givere (P = 0,034; figur 4a) på grunn av den relativt dårlige induksjonen av en T-cellerespons ved vaksinasjon og/eller tidligere infeksjon (tilleggsfigur 11).Tilsvarende var verken RBD-, S1-, S2-bindende IgG-responser (figur 4b–d) eller RBD-, S1-nøytraliserende antistoffresponser spesifikke for villtype eller delta SARS-CoV-2 (B. 1.617).(Supplerende figur 12).Individer med betydelig risiko for infeksjon kan identifiseres.I motsetning til den venøse kohorten, skiller heller ikke N-relaterte IgG-responser COVID-19-risiko (Figur 4e), noe som tyder på at Omicron-varianten (B.1.1.529) øker immununnvikelse hos tidligere infiserte individer, som nylig beskrevet 21. Derimot var styrken til den SARS-CoV-2-spesifikke IFN-γ T-celleresponsen igjen den viktigste variabelen for å bestemme individuelle odds for å teste positivt for COVID-19 (figur 4f).Totalt sett hadde deltakere med en SARS-CoV-2-spesifikk kapillær T-cellerespons ≤23,7 pg/mL IFN-γ en 14,9 % risiko for infeksjon etter tre måneder sammenlignet med en respons >141,6 pg/ml.ml IFN.-γ hadde en infeksjonsrisiko på 4,4 % (tabell 2).
IFN-γ+ T-celleresponser spesifikke for SARS-CoV-2 (a; *P = 0,034) og SARS-CoV-2 spesifikt IgG-målrettet reseptorbindende domene (“RBD”) (b), pigg underenhet 1 (' S1′) (c), piggunderenhet 2 ('S2') (d) og nukleokapsidbindingsreaksjon ('N') (e).Deltakere identifisert som positive for COVID-19-tester (PCR og/eller lateral blodstrømstest), alle infeksjoner skjedde innen 3 måneder etter blodprøvetaking.Sammenligninger ble gjort ved å bruke en to-halet Mann-Whitney-test.Dataene vises som diagrammer (senterlinje ved median, øvre grense ved 75. persentil, nedre grense ved 25. persentil) med værhår ved minimums- og maksimumsverdier.Hver prikk representerer en donor.ns er ikke viktig.Varmekartet f viser Spearmans rang-korrelasjoner mellom variabler for det angitte datasettet.Sammenligninger som ikke var statistisk signifikante ble ekskludert fra matrisen og merket med tomme celler.Rådata leveres i form av rådatafiler.
Når vi går inn i neste fase av COVID-19-pandemien, vil fokuset skifte fra forebygging til individuell risikostyring og identifisering av sårbare medlemmer av samfunnet.Å etablere korrelater av immunitet mot COVID-19 er avgjørende for å effektivt identifisere og behandle disse høyrisikogruppene.Det er nå økende bevis for at T-celleimmunitet beskytter mot SARS-CoV-2-infeksjon og begrenser alvorlighetsgraden av COVID-1910.Dataene som presenteres her viser at den kombinerte styrken til SARS-CoV-2-spesifikke IFN-γ+ T-celleresponser mot pigg-, membran- og nukleokapsidstrukturproteiner gir større beskyttelse mot COVID-19 enn antistoffbinding.19 fremmer eller nøytraliserer responser. .og bør tas i betraktning ved vurdering av individ- og/eller flokkimmunitet.RNA-virus som SARS-CoV-2 eller influensa A-virus (IAV) unngår serologisk nøytralisering ved raskt å utvikle eksponerte B-celleepitoper på overflateantigener gjenkjent av antistoffer.Den beskyttende immunresponsen gitt av T-celler kan reflektere målrettingen av epitoper fra mer konserverte regioner av virale proteiner som ikke raskt kan unnslippe en immunrespons.T-cellemediert beskyttelse mot nye SARS-CoV-2-varianter ligner den heterosubtypiske beskyttelsen mediert av T-cellemålretting av konserverte iboende proteiner sett i IAV22,23-subtyper.
Til tross for det enorme potensialet for å måle den cellulære immunresponsen mot COVID-19, har relativt lite oppmerksomhet blitt viet til utviklingen av nøyaktige, høykapasitets, standardiserte T-celleanalyser.De tradisjonelle kompleksitetene og kostnadene knyttet til måling av T-celleresponser utelukker nøyaktig bestemmelse av T-celleimmunitet ved screening for storpopulasjonsimmunitet.Mens flere kommersielle fullblodpeptidstimuleringsanalyser nylig har blitt tilgjengelige, krever alle for tiden en phlebotomist for å få blod, noe som begrenser tilgjengeligheten og omfanget.Kapillærblodsystemer er mye brukt for å bestemme prevalensen av SARS-CoV-2-antistoffer i en populasjon.Vi tilpasset kapillærblodanalyser for å utføre fullblodspeptidstimuleringsanalyser for å vurdere T-celle-reaktivitet til SARS-CoV-2-strukturproteiner og SARS-CoV-2-spesifikke antistoffresponser.Faktisk er den kombinerte målingen av SARS-CoV-2-spesifikke antistoffer og T-celler i samme kapillærblodprøve veldig attraktiv: (i) reduserer behovet for flere blodprøver per deltaker, (ii) forbedrer deltakeropplevelsen og forståelsen;(iii) forbedre logistikk og redusere duplisering, (iv) redusere miljøpåvirkning ettersom mindre laboratorieforbruksvarer og prøvelevering er nødvendig.Selv om den generelle IFN-y-reaktiviteten var lik mellom matchede venøse og kapillære blodprøver, ble den observert å være lavere i den kapillære blodkohorten til deltakerne (fig. 4a) sammenlignet med den venøse blodkohorten (fig. 2a).IFN-γ-verdier Det er flere forklaringer på dette funnet, nemlig at et stort antall deltakere med komorbiditeter som krever immunsuppressiv terapi ble rekruttert til den kapillære blodprøvetakingskohorten (tabell 1) og levedyktighet og/eller funksjon av T-celler hentet fra vaskulære prøvene kan være lave, spesielt med tanke på betingelsene for langtidslagring av prøver før peptidstimulering.
Den for tiden allment tilgjengelige COVID-19-vaksinen gir den beste beskyttelsen mot alvorlig sykdom for de fleste mottakere innen 6 måneder etter vaksinasjon8.Oppmuntrende nok, til tross for den dårlige vaksineinduserte serologiske nøytraliseringen av SARS-CoV-26,7-varianter, forble T-celleresponser fremkalt ved vaksinasjon mot villtype SARS-CoV-2 svært reaktive, da 25 andre dukket opp.Dataene vi presenterer her viser viktigheten av en bredere vurdering av vaksineimmunogenisitet, og fremhever vaksiner med utilstrekkelig T-celleimmunitet for å forhindre plutselig infeksjon og vedvarende overføring av viruset.Vi observerte også at mange uvaksinerte individer rekruttert til kapillærkohorten hadde en signifikant respons av SARS-CoV-2-spesifikke T-celler (og N-bindende IgG) uavhengig av tidligere vaksinasjon, noe som sannsynligvis skyldes tidligere infeksjon.I stedet for å vaksinere passende individer, bør deres risiko for infeksjon vurderes basert på deres nåværende immuniseringsstatus og de informerte valgene som er tatt.
Begrensninger for denne studien inkluderer forsikringen om at deltakerne selv rapporterte infeksjon med SARS-CoV-2 etter blodprøvetaking for å bestemme relevansen av immunitet;noen deltakere kan ha asymptomatisk infeksjon og kan ikke gjennomgå PCR og/eller lateral flow-testing for COVID-19.Datasettet vårt manglet også informasjon om deltakernes medisiner på tidspunktet for blodprøvetaking.I tillegg, gitt at alle våre deltakere rapporterte bare milde/moderate symptomer eller ingen symptomer, var det ikke mulig å identifisere immunresponser fra vårt datasett som spådde en økt risiko for alvorlig sykdom og sykehusinnleggelse for COVID-19.Imidlertid har tilstedeværelsen av CD8+ T-celleresponser mot nukleokapsidspesifikke epitoper nylig blitt assosiert med beskyttelse mot alvorlig COVID-1926.I tillegg målte ikke analysen som ble brukt her T-celleresponser på spesifikke tidlig uttrykte SARS-CoV-2 ikke-strukturelle proteiner som nylig har vist seg å fortrinnsvis akkumulere hos seronegative helsearbeidere som har vært i kontakt med infiserte pasienter.Basert på dette arbeidet, gitt utbredelsen av samfunnsoverføring på rekrutteringstidspunktet og den høye sannsynligheten for kontaktinfeksjon i befolkningen, ser antallet SARS-CoV-2-spesifikke T-celler funnet i testene våre også ut til å være i stand til å fjernes.subkliniske infeksjoner i våre kohorter.Til slutt målte vi ikke interleukin 2-produksjon av T-celler fordi vårt tidligere arbeid viste dårlig identifikasjon av SARS-CoV-214-spesifikke T-celleresponser, selv om IL-2-spesifikke responser kan indikere forhåndseksisterende kryssreaktivitet.celler assosiert med forsvar mot SARS-CoV-211-infeksjon.
Til sammen fremhever disse dataene det grunnleggende behovet for langsiktige longitudinelle studier som inkorporerer SARS-CoV-2-spesifikke T-celleresponser i mål på immunitet i populasjonsskala.Denne innsatsen kan bli hjulpet av utviklingen av en ny kapillær blodprøve som måler T-cellerespons.
Forskningsprosjektet rekrutterte deltakere fra februar 2021 til mars 2022. Kohorten av friske givere (n = 148) som donerte venøse blodprøver besto primært av universitetsansatte og studenter som deltok i Cardiff Universitys COVID-19-screeningtjeneste eller ansatte ved en barneskole i Cardiff.Alle deltakerne var ellers friske og rapporterte ikke at de tok noen immundempende legemidler (se tabell 1 for egenskaper).Kohorten av deltakere som donerte kapillære blodprøver inkluderte alle frivillige givere (i alderen 18+) fra hele Storbritannia.Mellom 24. januar og 14. mars 2022 ble 342 deltakere registrert i studien, hvorav 299 sendte inn blodprøver til laboratoriet.Mange deltakere forble uvaksinerte og/eller rapporterte om alvorlige komorbiditeter, inkludert autoimmune sykdommer og kreft (se tabell 1 for egenskaper).Denne studien fikk etisk godkjenning fra Newcastle and North Tyneside 2 Research Ethics Committee (ID IRAS: 294246) og Cardiff University School of Medicine Research Ethics Committee (SREC ref: SMREC 21/01).Alle deltakerne ga skriftlig informert samtykke før inkludering.Deltakerne mottok ingen kompensasjon for å delta i denne studien.
Venøse blodprøver ble tatt ved venepunktur i 6 eller 10 ml litium- eller natriumheparinvakutainere (BD).Kapillærblodprøver ble tatt med en fingerlansett og deretter samlet i heparin mikrobeholdere (BD).Det kreves minimum 400 µl blod;enhver prøve mindre enn dette beløpet vil bli avvist.Andre årsaker til prøveavvisning inkluderte massiv koagulasjon og/eller hemolyse og manglende evne til å samle viskøst plasma for analyse (tilleggsfig. 5).Totalt 299 kapillærblodprøver var tilgjengelige for å vurdere antistoffresponser, hvorav 270 prøver også var tilgjengelige for å vurdere T-celleresponser.
SARS-CoV-2-spesifikke T-celleresponser ble vurdert ved bruk av COVID-19 Immuno-T-analysen (ImmunoServ Ltd) og utført som tidligere beskrevet14.Kort fortalt ble en 6 ml eller 10 ml natriumheparin (BD) venøs vacutainer tatt fra hver deltaker og behandlet i laboratoriet innen 12 timer etter blodprøvetaking.Selv om de fleste prøvene ble behandlet innen 24 timer, ble ett 400–600 μl heparinisert mikroblødning (BD) kapillærblod samlet innen 48 timer etter prøvetaking av fingerstikk.Venøse og/eller kapillære blodprøver ble stimulert med separate peptidpooler spesifikke for SARS-CoV-2 (villtypevariant) som tidligere beskrevet14.Dette peptidbiblioteket inneholder 420 15-mer-sekvenser med 11 overlappende aminosyrer som spenner over hele spikeproteinet (S1 og S2) (S; NCBI-protein: QHD43416 1), nukleokapsidfosfoprotein (NP; NCBI-protein: QHD43423 2) og membran (Mglycoprotein) ; NCBI protein: QHD43419 1) kodende sekvenser (referert til som "S-/NP-/M-kombinatorisk peptidbibliotek").Alle peptider ble renset til >70 %, oppløst i sterilt vann og brukt i en sluttkonsentrasjon på 0,5 μg/ml per peptid.Prøver ble inkubert ved 37°C i 20-24 timer.Rørene ble deretter sentrifugert ved 5000 xg i 3 minutter og ~150 ul plasma ble samlet fra toppen av hver blodprøve.Oppbevar plasmaprøver ved -20 °C i opptil én måned før du kjører cytokin-/antistoffdeteksjonsanalyser.
IFN-γ ble målt ved bruk av IFN-γ ELISA MAX Deluxe Set (BioLegend, katalognummer 430116) og utført i henhold til produsentens instruksjoner.Umiddelbart etter at stoppløsning (2N H2SO4) ble tilsatt, ble mikroplaten avlest ved 450 nm ved bruk av en BioLegend Mini ELISA plateleser.IFN-y ble kvantifisert ved standard kurveekstrapolering ved bruk av GraphPad Prism.Verdier under den nedre deteksjonsgrensen for analysen ble registrert som 7,8 pg/ml, verdier over den øvre deteksjonsgrensen for analysen ble registrert som 1000 pg/ml.
Anti-SARS-CoV-2 RBD/S1/S2/N IgG-antistoffer ble målt ved bruk av et Bio-Plex Pro Human IgG SARS-CoV-2 4-plex panel (Bio-Rad, kat.nr. 12014634) og merket iht. produsentens instruksjoner.bruksanvisning .Prøver som rapporterte verdier over grensen for kvantifisering ble analysert på nytt ved en fortynning på 1:1000.Den gjennomsnittlige fluorescensintensiteten til kulene ble målt på et Bio-Plex 200 instrument (Bio-Rad).Antistoffkonsentrasjoner ble beregnet ved VIROTROL SARS-CoV-2 enkeltkontrollanalyse (Bio-Rad) og konvertert til WHO/NIBSC 20/136 International Reference Standard Units (BAU/mL) ved bruk av produsentens kalibreringsfaktor.
RBD- og S1-underenhetsspesifikke nøytraliserende antistoffer mot SARS-CoV-2 villtype og delta (B.1.617) SARS-CoV-2-linjer ble målt ved bruk av Bio-Plex Pro Human SARS-CoV-2 Variant Neutralization Antibody Kit (Bio) -Rad , delnr. 12016897), i henhold til produsentens anvisninger.Mål den gjennomsnittlige fluorescensintensiteten på Bio-Plex 200 (Bio-Rad) og beregn prosent hemming (dvs. nøytralisering) ved å bruke følgende formel:
Infeksiøse nøytraliseringsanalyser for SARS-CoV-2 ble utført som tidligere beskrevet28.Kort fortalt ble 600 PFU av villtype SARS-CoV-2 inkubert med 3 ganger seriefortynninger av plasma i duplikat i 1 time ved 37 °C.Blandingen ble deretter tilsatt til VeroE6-celler i 48 timer.Monolag ble fiksert med 4 % paraformaldehyd, permeabilisert med 0,5 % NP-40 og inkubert i 1 time i blokkeringsbuffer (PBS inneholdende 0,1 % tween og 3 % skummet melk).Primært antistoff (anti-nukleokapsid 1C7, Stratech) ble tilsatt blokkeringsbuffer i 1 time ved romtemperatur.Etter vasking ble et sekundært antistoff (anti-muse-IgG-HRP, Pierce) tilsatt blokkeringsbuffer i 1 time.Monolag ble vasket, utviklet med Sigmafast OPD og lest på en Clariostar Omega plateleser.Brønner uten virus, uten virus, men uten antistoffer, og normaliserte sera som viser middels aktivitet ble inkludert i hvert forsøk som kontroller.
Statistisk analyse ble utført i GraphPad Prism (versjon 9.4.1).Normaliteten til datasettet ble testet ved bruk av Shapiro-Wilk-testen.Ikke-parametriske kriterier ble brukt for alle sammenligninger.Mann-Whitney-testen ble brukt for uparrede prøver.Alle testene var tosidige med en nominell signifikansgrense på P ≤ 0,05.
Den første utforskende analysen av datasettet ble gjort i R (versjon 4.0.3).Dette inkluderer utviklingen av Spearmans univariate rangkorrelasjonsmatrise, der korrelasjonen mellom to variabler er representert ved størrelsen og fargen på rutene.Statistisk signifikans mellom assosiasjoner ble beregnet ved bruk av Spearmans rho, hvor verdier ≤0,05 ble ansett som signifikante.Sammenligninger som ikke var statistisk signifikante ble ekskludert fra matrisen og merket med tomme celler.P-verdier ble justert for flere sammenligninger ved hjelp av Holms korreksjon.En binær logistisk regresjonsmodell ble brukt for å simulere effekten av variabler i datasettet på positiv respons på COVID-19.IFN-γ T-celleresponser og anti-RBD/S1/S2/N IgG-titerskårer ble konvertert til faktorer, hvor hvert individ ble tildelt den passende kvartilen for hver skåre.Deretter ble det utviklet en innledende forskningsmodell ved bruk av glm-funksjonen i statistikkpakken (V4.0.3).Oddsratioene avledet fra denne originale modellen ble trukket ut fra koeffisientene til modellen ved å bruke 'odds_plot'-funksjonen i OddsPlotty-pakken (V1.0.2).Når vi utviklet kryssvalideringsmodellen, brukte vi «bestglm»-funksjonen fra bestglm-pakken (V0.37.3) for å begrense brukerbias og sikre at den beste undergruppen av prediktorer kan velges.Metoden som ble valgt var "uttømmende" og informasjonskriteriet som ble brukt for å vurdere modelltilpasning var AIC.Den samme arbeidsflyten som er beskrevet ovenfor ble brukt for å få oddsratioen.
For mer informasjon om studiedesign, se Nature study abstract koblet til denne artikkelen.
Brev og forespørsler om materialer skal rettes til Dr. Martin Scarr eller professor Andrew Godkin.Denne artikkelen inneholder de originale dataene.
R-koden som brukes til å lage statistiske modeller er offentlig tilgjengelig uten forespørsel29.Opptrykksinformasjon og lisenser finnes på www.nature.com/reprints.
Munro, APS et al.Sikkerhet og immunogenisitet av syv COVID-19-vaksiner som en tredje dose (booster) etter to doser av ChAdOx1 nCov-19 eller BNT162b2 (COV-BOOST) i Storbritannia: en fase 2, blindet, multisenter, randomisert, kontrollert studie.Lancet 398, 2258–2276 (2021).
Stewart, ASV et al.Immunogenisitet, sikkerhet og reaktogenisitet av heterolog primærvaksinasjon mot COVID-19 (Com-COV2) ved bruk av mRNA, virale vektorer og proteinadjuvansvaksiner i Storbritannia: en fase 2, enkeltblind, randomisert studie, ikke-inferioritetstest.Lancet 399, 36–49 (2022).
Lee, ARIB et al.Effekten av COVID-19-vaksiner hos immunkompromitterte pasienter: En systematisk gjennomgang og metaanalyse.BMJ 376, e068632 (2022).
Dejnirattisai, W. et al.Redusert nøytralisering av SARS-CoV-2 mikron variant B.1.1.529 med serum etter immunisering.Lancet 399, 234–236 (2022).
Lipsich M, Krammer F, Regev-Yohai G, Lustig Y og Baliser RD Gjennombruddsinfeksjon hos SARS-CoV-2-vaksinerte individer: måling, årsaker og konsekvenser.Nasjonal prest for immunologi.https://doi.org/10.1038/s41577-021-00662-4 (2021).
Levin, EG et al.Svekket immunhumoral respons på BNT162b2 Covid-19-vaksine i 6 måneder.N. eng.J. Medisin.385, e84 (2021).
Carreño, JM et al.Aktivitet av rekonvalesent- og vaksinesera mot SARS-CoV-2 Omicron.Nature 602, 682–688 (2022).
Chemaitelly, H. et al.Varighet av beskyttelse av Qatari mRNA-vaksinen mot SARS-CoV-2 Omicron BA.1 og BA.2 subvarianter.medrxiv https://doi.org/10.1101/2022.03.13.22272308 (2022).
Tai, MZ et al.Frekvensen av minne B-celler avtar med gjennombruddsinfeksjon av COVID-19 deltavaksine.Molekylær medisin EMBO.14, e15227 (2022).
Kundu, R. et al.Kryssreaktive minne-T-celler er assosiert med å beskytte COVID-19-kontakter mot SARS-CoV-2-infeksjon.Nasjonal kommune.13, 80 (2022).
Geurtsvan Kessel, CH et al.Distinkte SARS CoV-2 omicron-reaktive T-celle- og B-celleresponser hos COVID-19-vaksinemottakere.vitenskapen.Immunologi.https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abo2202 (2022).
Gao, Yu et al.Arvede SARS-CoV-2-spesifikke T-celler gjenkjenner Omicron-varianter.Nasjonal medisin.28, 472–476 (2022).
Scarr, MJ et al.Måling av SARS-CoV-2-spesifikke T-celler fra fullblod avslører asymptomatisk infeksjon og vaksineimmunogenisitet hos friske individer og pasienter med solid organkreft Immunologi https://doi.org/10.1111/imm.13433 (2021).
Tan, AT et al.Rask måling av SARS-CoV-2 spike T-celler i fullblod fra vaksinerte og naturlig infiserte individer.J. Clinical.investere.https://doi.org/10.1172/JCI152379 (2021).
Tallantyre, EU et al.COVID-19-vaksinerespons hos multippel sklerosepasienter.installere.Nevroner.91, 89–100 (2022).
Bradley RE et al.Vedvarende COVID-19-infeksjon med Wiskott-Aldrich syndrom forsvant etter terapeutisk vaksinasjon: en saksrapport.J. Clinical.Immunologi.42, 32–35 (2022).